Comment Fonctionne la Microscopie a Fluorescence

Un microscope a fluorescence eclaire l’echantillon avec une lumiere a une longueur d’onde d’excitation specifique, en utilisant un jeu de filtres adapte au fluorochrome utilise. Le fluorochrome absorbe cette lumiere et la reemet a une longueur d’onde plus longue, qui traverse un miroir dichroique et un filtre d’emission pour atteindre l’oculaire ou la camera, de sorte que seul le signal fluorescent est visible sur un fond sombre. Differents jeux de filtres (generalement appeles bleu, vert, UV ou V) excitent differents fluorochromes, et la source d’eclairage est soit une lampe a mercure HBO traditionnelle, soit une LED, chacune avec des compromis differents en termes de luminosite, de cout d’exploitation et de temps de chauffe.

Applications Courantes

L’application la plus courante est l’immunofluorescence, ou des anticorps marques par fluorescence se lient a des proteines ou antigenes specifiques pour reveler leur localisation et leur expression dans les cellules et tissus, largement utilisee en biologie cellulaire, developpement de medicaments et diagnostic clinique. La microscopie a fluorescence est aussi utilisee en microbiologie pour la detection de pathogenes a base de fluorochromes, y compris la coloration a l’auramine pour le depistage de la tuberculose, en cytogenetique pour l’etude des chromosomes et des noyaux avec des contre-colorations DAPI ou Hoechst, et en science des materiaux pour les etudes d’autofluorescence et de marquage par fluorochromes des polymeres et fibres.

LED ou HBO : Choisir une Source d’Eclairage

Les sources de fluorescence LED offrent une mise en marche instantanee, aucun delai de chauffe ni de refroidissement, et une duree de vie superieure a 65 000 heures sans remplacement de lampe, au prix d’une gamme plus etroite de longueurs d’onde d’excitation par filtre ou cube installe. Les lampes a mercure HBO traditionnelles delivrent une source plus lumineuse et a spectre plus large, qui reste la methode la plus utilisee pour les applications de recherche, au prix d’une duree de vie d’ampoule d’environ 300 heures et d’un temps de chauffe avant utilisation. Optika propose les deux dans sa gamme, permettant aux laboratoires de choisir selon leurs besoins en fluorochromes et leur mode d’utilisation.

Choisir Entre les Series

La serie B-290 apporte la fluorescence LED sur une plateforme binoculaire ou trinoculaire d’entree de gamme avec un seul jeu de filtres bleu, adaptee au criblage de routine avec des fluorochromes courants comme le FITC et la GFP. La serie B-380 propose a la fois un modele HBO traditionnel (B-383FL) avec des jeux de filtres bleu et vert pour la plus large compatibilite de fluorochromes, et un modele LED (B-383LD) pour une fluorescence de routine pratique et a faible entretien. La serie B-510 passe a un champ de vision de 22 mm (400x sur le modele HBO) avec des objectifs IOS W-PLAN F Semi-Apochromatiques pour une resolution et un contraste ameliores, et comprend des plateformes LED modulaires (B-510LD4, B-510LD4-SA) avec 4 positions de filtres vides que le laboratoire configure avec ses propres cubes LED Fluorescence Cube.

Differences au Sein de Chaque Serie

Le B-292LD1 est le modele fluorescence binoculaire B-290 standard a 1000x ; les B-292LD1.50 et B-293LD1.50 sont des variantes 500x en versions binoculaire et trinoculaire respectivement, adaptees lorsqu’un grossissement plus faible suffit. Dans la serie B-380, le B-383FL utilise la lampe a mercure HBO 100 W traditionnelle avec des jeux de filtres bleu et vert inclus, tandis que le B-383LD la remplace par un cube LED a une position pour un usage de routine sans entretien de lampe. Dans la serie B-510, le B-510FL est le modele de recherche HBO avec optique Semi-Apochromatique et curseur de filtres a 4 positions ; le B-510LD4 est la plateforme LED modulaire avec optique IOS W-PLAN standard et 4 positions vides pour des cubes LED personnalises, tandis que le B-510LD4-SA associe la meme plateforme LED modulaire a une optique Semi-Apochromatique pour un travail de fluorescence a plus haute resolution.